An overview of antimicrobial resistance and its public health significance

Multiple papers have been published regarding the bacterial resistance theme over the last years. A variety of information has reached general and scientific public, daily bringing up data on new resistant microorganisms, new drugs, outbreaks, epidemiological news, resistance gene dissemination, and the lack of information in a particular field has caught our attention: the public health department. Most of researchers, physicians and government employees interpret the public health field as a separate department, not linked to this antibiotic resistance era that we are living nowadays. In this paper we carefully tried to fill in the blanks between public health and the bacteria resistance issue, also considering historical, social, economical and biological problematic that come with this possible pre-antibiotic era.

Molecular epidemiology of Listeria monocytogenes isolated from different sources in Brazil / Epidemiologia molecular de Listeria monocytogenes isoladas de diferentes fontes no Brasil

Listeria monocytogenes is an important foodborne pathogen that primarily affects pregnant women, neonates, the elderly and immune-compromised individuals, and it may cause abortion, septicemia, and meningitis. From the 13 capsular groups described, serotypes 4b, 1/2b and 1/2a are most closely related to human infection. For this reason, serotyping has limited value as an epidemiological tool; thus, improved discriminatory typing methods are required to enhance knowledge of L. monocytogenes contamination and infection. The aim of this study was to characterize the genetic diversity of L. monocytogenes isolates in the pork processing industry in Sao Paulo, Brazil and human infection isolates by ERICPCR and single enzyme AFLP. Serotypes 1/2c and 4b were frequent among isolates from pork and slaughterhouse/market environments, whereas serotypes 4b and 1/2a were observed among human isolates. ERIC-PCR and AFLP revealed 34 and 31 distinct profiles, respectively, which had tendencies of separation according to serogroup and isolate origin. The genetic profiles from slaughterhouse and market environments suggest the possibility of different sources of Listeria contamination in the environment, although in certain cases, continuous contamination caused by the persistence of clonal strains is also a possibility.

Listeria monocytogenes é um importante patógeno de origem alimentar que afeta principalmente grávidas, neonatos, idosos e indivíduos imunocomprometidos, e pode causar abortamento, septicemia e meningite. Dos 13 grupos capsulares descritos, os sorotipos 4b, 1/2b e 1/2a são os mais relacionados à infecção humana. Por esta razão, a sorotipagem possui valor limitado como ferramenta epidemiológica e, dessa forma, métodos mais discriminatórios são necessários para melhorar o conhecimento sobre a contaminação e a infecção por L. monocytogenes. O objetivo deste estudo foi caracterizar a diversidade genética de isolados de L. monocytogenes da indústria de processamento de carne suína noEstado de São Paulo, Brasil, e compará-los a isolados de casos de infecção humana através do ERIC-PCR e AFLP com uma única enzima. Os sorotipos 1/2c e 4b foram frequentes em carne suína e ambientes de abatedouros e mercados, enquanto os sorotipos 4b e 1/2a foram observados nos isolados de humanos. ERIC-PCR e AFLP resultaram em 34 e 31 perfis distintos, respectivamente, com uma tendência a separar de acordo com o sorogrupo e a origem do isolado. Os perfis genéticos de ambiente dos abatedouros e mercados sugerem a possibilidade de diferentes origens de contaminação por Listeria nos ambientes estudados, porém, em alguns casos, é possível que ocorra a persistência de cepas clonais causando contaminação contínua.

Characterization of Vibrio Parahaemolyticus isolated from oysters and mussels in São Paulo, Brazil / Caracterização de Vibrio parahaemolyticus isolados de ostras e mexilhões em São Paulo, Brasil

Vibrio parahaemolyticus is a marine bacterium, responsible for gastroenteritis in humans. Most of the clinical isolates produce thermostable direct hemolysin (TDH) and TDH-related hemolysin (TRH) encoded by tdh and trh genes respectively. In this study, twenty-three V. parahaemolyticus, previously isolated from oysters and mussels were analyzed by PCR using specific primers for the 16S rRNA and virulence genes (tdh, trh and tlh) and for resistance to different classes of antibiotics and PFGE. Nineteen isolates were confirmed by PCR as V. parahaemolyticus. The tlh gene was present in 100 percent of isolates, the tdh gene was identified in two (10.5 percent) isolates, whereas the gene trh was not detected. Each isolate was resistant to at least one of the nine antimicrobials tested. Additionally, all isolates possessed the blaTEM-116 gene. The presence of this gene in V. parahaemolyticus indicates the possibility of spreading this gene in the environment. Atypical strains of V. parahaemolyticus were also detected in this study.

Vibrio parahaemolyticus é uma bactéria marinha, responsável por gastroenterite em humanos. A maioria dos isolados clínicos produzem hemolisina termoestável direta (TDH) e hemolisina TDH-relacionada (TRH) codificadas por genes tdh e trh, respectivamente. Neste estudo, vinte e três V. parahaemolyticus, previamente isolados de ostras e mexilhões foram analisados por PCR utilizando indicadores específicos para o gene 16S rRNA, genes de virulência (tdh, trh e tlh), resistência a diferentes classes de antibióticos, e PFGE. Dezenove isolados foram confirmados por PCR, como V. parahaemolyticus. O gene tlh estava presente em 100 por cento dos isolados, o gene tdh foi identificado em dois (10,5 por cento) dos isolados, enquanto que o gene trh não foi detectado. Cada isolado foi resistente a pelo menos um dos nove antibióticos testados. Além disso, todos os isolados apresentaram resultado positivo para o gene blaTEM-116. A presença deste gene em V. parahaemolyticus indica a possibilidade de propagação desse gene no ambiente. Cepas atípicas de V. parahaemolyticus foram também detectadas neste estudo.

Presence of blaTEM-116 gene in environmental isolates of Aeromonas hydrophila and Aeromonas jandaei from Brazil

It is known that Aeromonas spp. possess different chromosomal â-lactamase genes. Presence and phenotypic expression of blaTEM, blaSHV, and blaCTX-M ESBL-encoding genes were investigated in environmental water isolates of Aeromonas hydrophila and Aeromonas jandaei. Presence of blaSHV and blaCTX-M genes was not observed, and blaTEM gene was verified in 91 percent of the isolates. Sequencing of 10 fragments showed the occurrence of blaTEM-116.

A modified method for detecting Cryptosporidium oocysts using DNA templates extracted from environmental samples / Método modificado para detecção de oocistos de Cryptosporidium utilizando DNA extraído de amostras ambientais

The protozoan parasite Cryptosporidium has emerged as one of the most important water contaminants, causing outbreaks of waterborne diarrhea worldwide. In order to assess the importance for public health of this pathogen’s presence in environmental samples, several methods have been developed to isolate and detect Cryptosporidium oocysts. In the present study, a reliable and reproducible method has been standardized for detecting and identifying Cryptosporidium oocysts in water samples in the State of São Paulo, Brazil as the first step for future genotyping studies. Water samples were concentrated by filtration, and then subjected to ultrasound in Tween 80 0.1%, the obtained sediment was transferred into micro tubes containing 1.0 ml of distilled water and stored at -20ºC. DNA was extracted with the addition of 1% PVP in lysis buffer, the organic extraction was performed in Phase Lock GelHeavy®. There was a 214 bp amplification on the expected fragment in five out of the 11 water samples analyzed. The results of this study demonstrated the application usefulness of the standardized test in epidemiological studies and surveillance programs because the technology allowed to increase significantly the amount of amplified product.

O protozoário parasito Cryptosporidium tem emergido como um dos mais importantes contaminantes da água, causando surtos de diarreia de veiculação hídrica em todo mundo. Para avaliar o significado, para a saúde pública,da presença desse agente patogênico em amostras ambientais, vários métodos têm sido desenvolvidos para isolar e detectar oocistos de Cryptosporidium. No presente estudo foi padronizado um método confiável e reprodutível para detectar e identificar oocistos de Cryptosporidium em amostras de água no Estado de São Paulo, Brasil, comoo primeiro passo para futuros estudos de genotipagem. Amostras de água foram concentradas por filtração,submetidas a ultrasom em solução de Tween 80 a 0.1%; o sedimento obtido foi transferido para microtuboscontendo 1,0 ml de água destilada e conservado a -20ºC. O DNA foi extraído com adição de 1% de PVP no tampão de lise; a extração foi realizada em tubo Phase Lock Gel Heavy®. Houve amplificação do fragmento esperado de 214 bp em cinco das 11 amostras de água analisadas. Os resultados deste estudo demonstraram a utilidade deaplicação do teste padronizado em estudos epidemiológicos e em programas de vigilância, em virtude da técnica ter apresentado sensibilidade para incrementar significativamente a quantidade de produto amplificado.

Inspeção sanitária em creches: uma proposta de roteiro de inspeção / Sanitary inspection in daycare centers: proposing a guideline for inspection

O trabalho apresenta um projeto de intervenção na realidade concreta das ações de Vigilância Sanitária, através da proposição de um roteiro para inspeção destinado a creches. Os objetivos específicos foram identificar os fundamentos jurídicos, técnico-científicos e sanitários que possam nortear a prática de inspeções sanitárias em creches; elaborar uma proposta de roteiro que permita um processo de análise mais explícito, objetivo e homogêneo e discutir a contribuição do instrumento proposto para a atividade de Vigilância Sanitária, com base na literatura científica pesquisada. Para a realização do trabalho foi feita uma revisão fundamentada em textos didáticos e normativos das áreas de educação e saúde, legislação sobre Vigilância Sanitária e Educação Infantil, outros roteiros já existentes e artigos da literatura científica sobre agravos à saúde em crianças que frequentam creches. O trabalho focaliza o conteúdo da legislação específica vigente e sua aplicabilidade na prática da inspeção sanitária em creches e baseia-se na Portaria - MS n. 321 de 26.05.1988. Este estudo apresenta um instrumento para avaliar a qualidade do atendimento nas creches sob o aspecto da promoção da saúde e sugere estudos posteriores de validação para o contexto, com a possível inclusão de um sistema de classificação para os padrões de conformidade, por meio de uma metodologia estatística.

Padarias: a visão do consumidor sobre as condições higiênico-sanitárias / Bakeries: a vision for consumers on the hygienic – sanitary

Atualmente, as padarias caracterizam-se por serem estabelecimentos comerciais de grande movimento e de enorme variedade de produtos, os quais quando em condições adversas de conservação e manipulação podem ser responsáveis por DTAs. No presente estudo, foram visitadas 30 padarias, observando-se: manipuladores, estrutura física, higiene ambiental, condições da distribuição dos produtos e atitudes dos consumidores. Utilizou-se um check list e os pesquisadores atuaram como consumidores comuns destes estabelecimentos. Os resultados obtidos permitiram verificar que todos os estabelecimentos visitados apresentavam falhas em algum critério da legislação vigente, destacando-se a ausência de proteção dos cabelos, falta de higienização das mãos, piso sujo e conservação em temperaturas abusivas. Dessa forma, as condutas relacionadas à conservação dos alimentos merecem atenção dos órgãos de vigilância sanitária e o treinamento dos manipuladores deve ser enfatizado, pois as não conformidades encontradas podem vir a constituir perigo para a saúde dos consumidores. Sugere-se, também, que os responsáveis pelas padarias utilizem um check list como instrumento de garantia da qualidade dos produtos comercializados.

Aspectos sanitários da comercialização de pescado em feiras livres da cidade de São Paulo, SP/Brasil / Sanitary aspects of fish comercialization in street markets of the city of São Paulo, SP/Brazil

O comércio de peixes e produtos derivados tem crescido substancialmente nas últimas décadas. Contudo, os procedimentos de preparo, de manipulação e de conservação, realizados sem precauções sanitárias, os tornam potencial risco ao consumidor, principalmente aos apreciadores de pratos à base de peixe cru. Foram avaliadas as práticas higiênico-santárias cotidianas realizadas pelos feirantes e a qualidade microbiológica de peixes comercializados em feiras livres. Vinte amostras de peixes foram avaliadas por meio de análises microbiológicas e os dados foram comparados aos aspectos higiênico-sanitários das respectivas feiras livres. Para avaliação dos aspectos sanitários foi utilizado o roteiro baseado em legislação específica, enquanto que as análises microbiológicas foram feitas de acordo com as normas estabelecidas pela ANVISA. Das 20 amostras de pescado, nove (45,0%) foram consideradas impróprias para o consumo de peixe cru em função dos níveis de coliformes termotolerantes e /ou da presença de Escherichia coli e vibrio cholerae não-O1/não-O139. Os resultados surgerem que a manipulação e higiene inadequadas, obsevadas em feiras livres, podem facilitar a transmissão de agentes patogênicos aos consumidores.

Protocol for DNA extraction of Cryptosporidium spp. oocysts in fecal samples / Protocolo para extração de DNA de oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras fecais

Molecular characterization of Cryptosporidium spp.oocysts in clinical samples is useful for public health since it allows the study of sources of contamination as well as the transmission in different geographical regions. Although widely used in developed countries, in Brazil it is restricted to academic studies, mostly using commercial kits for the extraction of genomic DNA, or in collaboration with external reference centers, rendering the method expensive and limited. The study proposes the application of the modifications recently introduced in the method improving feasibility with lower cost. This method was efficient for clinical samples preserved at -20 °C for up to six years and the low number of oocysts may be overcomed by repetitions of extraction.

A caracterização molecular de oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras clínicas é útil à saúde pública, pois permite estudo das fontes de contaminação e a transmissão em determinadas regiões geográficas. Apesar de largamente utilizada em países desenvolvidos, no Brasil está restrita aos estudos acadêmicos, na maioria utilizando kits comerciais para extração do DNA genômico, ou em colaborações com centros de referência externos, o que torna o método caro e limitado. Este estudo propõe a introdução de modificações nos métodos existentes para melhorar a viabilidade e baixar custos. O método proposto foi eficiente em amostras clínicas preservadas a -20 °C por até seis anos e o baixo número de oocistos pode ser contornado por replicadas extrações de DNA.

Avaliação das condições higiênico-sanitárias de restaurantes tipo self-service, por quilo, do município de São Paulo, durante o período de distribuição de refeições / Evaluation of the hygienical-sanitary conditions of restaurants type self-service, for kilo, of the city of São Paulo, during the period of distribution of meals

O objetivo deste estudo foi o de traçar um perfil microbiológico de alimentos servidos em estabelecimentos comerciais do tipo self-service, por quilo, na cidade de São Paulo, e identificar riscos inerentes ao inadequado controle térmico no processo de distribuição, que podem contribuir para sua contaminação. Com este propósito, foram coletadas 80 amostras de alimentos, de 20 estabelecimentos diferentes, registrando-se a temperatura durante o processo de distribuição e submetendo-se cada amostra às análises microbiológicas. A presença de bactérias coliformes fecais e Staphylococcus aureus sugerem que a temperatura e o tempo demandado para distribuição do alimento, representam importantes parâmetros para assegurar a segurança alimentar. Existe a necessidade urgente de adotar medidas de educação sanitária para todos aqueles que trabalham neste setor alimentício, bem como para aqueles que utilizam o serviço.

Aplicação de métodos moleculares no estudo de organismos do gênero Aeromonas / Application of molecular methods in the study of organisms of the Aeromonas sort

As doenças emergentes são o foco de crescente atenção entre os profissionais de saúde pública.A emergência de novas doenças , ressurgimento de velhas, e as já reconhecidas, representam desafios para o entendimento da cadeia ecológica casual, que incluem componentes sociais, econômicos, ambientais e biológicos.Aeromonas estão amplamente distribuídas no ambiente aquático.Algumas espécies estão associadas com uma ampla variedade de doenças em animais de sangue frio ou quente.Em humanos esses organismos são responsáveis por gastrenterites e infecções extrintestinais incluindo septicemia.A taxonomia do gênero e a identificação de algumas cepas são consideradas tarefas difíceis devido às reações atípicas observadas para esses organismos.A limitação associada aos métodos convencionais tem estimulado o interesse na aplicação de métodos moleculares para estabelecer o posicionamento taxonômico de microrganismos e também na determinação de relação, em estudos epidemiológicos.Essas técnicas vêm, crescentemente sendo consideradas no estudo de cepas de Aeromonas.Nesse estudo o sequenciamento do fragmento 16S rDNA e a hibridização DNA/DNA foram aplicados para Aeromonas clínicas e ambientais para a confirmação do posicionamento taxonômico das cepas.Eletroforese em campo pulsado (PFGE)e PCR com base em sequências repetitivas do genoma ERIC, BOX, e REP foram utilizados para gerar um padrão de bandas e estabelecer a relação entre as cepas.O posicionamento taxonômico de cepas de Aeromonas atípicas, isoladas de amostras diarréicas e ambientais, foi confirmado pelo sequenciamento e hibridização DNA/DNA.Uma nova espécie de Aeromonas foi obtida das amostras de fezes diarréicas e, a presença de A. veronii sobria e A. media no Continente Antártico foram confirmadas.O perfil de bandas (fingerprinting) demonstrou sua utilidade em estudos epidemiológicos do gênero Aeromonas e a relação genética muito próxima entre os isolados das amostras fecais sugerindo que os casos sejam considerados...

Alimentos geneticamente modificados: aspectos regulatórios e de saúde pública / Regulatory and public heath topics of genetically modified foods

Historicamente, o homem vem modificando os alimentos com a finalidade de aumentar a produção e também suas qualidades nutricionais. O uso da biotecnologia tornou possível esse propósito. Pela modificação genética dos organismos foi possível a inserção de características previamente selecionadas em uma determinada variedade de alimento. Essa nova metodologia tem gerado controvérsias e expectativas entre os consumidores bem como na comunidade científica e órgãos reguladores. Como forma de minimizar os efeitos oriundos da entrada desses produtos tecnológicos no País, os órgãos reguladores Brasileiros propuseram normas com a finalidade de garantir o direito à informação e assegurar a integridade da saúde do consumidor. Neste estudo foi realizada a revisão e análise crítica da literatura, sobre os organismos geneticamente modificados e dos alimentos transgênicos, bem como um levantamento das normas que se referem a esses organismos e as penalidades previstas quando da não observância dessas normas.

Ribotipagem de Aeromonas hydrophila, Aeromonas caviae, Aeromonas sobria e Aeronomas jandaei, potencialmente patogênicas, isoladas de amostras de água do reservatório de Guarapiranga, Säo Paulo / Ribopattern of Aeromonas hydrophila, Aeromonas caviae, Aeromonas sobria and Aeronomas jandaei, potentialy pathogenics, isolated in water of Guarapiranga reservoir, Säo Paulo, SP, Brazil

Estuda 60 cepas de Aeromonas, 15 A. hydrophila, 15 A. caviae, 15 A. sobria e 15 A. jandaei, isoladas de 5 diferentes pontos do reservatório de Guarapiranga, Säo Paulo, previamente testada quanto à produçäo de fatores de virulência, acúmulo de fluído em alça ligada e hemólise em ágar sangue, submetidas a ribotipagem e a análise do perfil plasmidial. Näo foi observada correlaçäo entre a presença de plasmídios e a produçäo de fatores de virulência pelas cepas estudadas. A ribotipagem demonstrou haver um polimorfismo genômico dentro de uma mesma espécie de Aeromonas e, ainda, diferenciou cepas isoladas de um mesmo ponto de amostragem

Pesquisa de Aeromonas spp potencialmente patogênicas em alguns pontos da represa de Guarapiranga destinados à recreaçäo e captaçäo para abastecimento público / Research of potencialy pathogenic Aeromonas spp in some points of Guarapiranga dam reserved for recreation and water captation for public supply

Estuda 64 amostras de água de superfície e 24 amostras de sedimento provenientes da Represa de Guarapiranga, SP, submetidas à tecnicas dos tubos múltiplos para a pesquisa de Aeromonas spp. As amostras foram submetidas a enriquecimento com água peptonada alcalina (APA), adicionado de 1 por cento de cloreto de sódio, pH 8,6 e isoladas em agar sangue contendo 10 mg/l de ampicilina. As colônias foram submetidas a triagem pelos testes de oxidase agar ferro de Kligler (Difco). Do total de cepas isoladas, 15 de A. hydrophila, 15 de Aeromonas caviae, 15 de A. sobria e 15 de A. jandaei foram submetidas ao teste de alça ligada em coelhos e teste de hemólise em ágar sangue de coelho e humano. A pesquisa de fatores de virulência revelou que 80 por cento das cepas de A. hydrophila, 73,3 por cento de A. caviae, 46,7 por cento de A. sobria e 86,6 por cento de A. jandaei causaram acúmulo de fluido em alça ligada de coelho e que 86,6 por cento de A. hydrophila, 33,3 por cento de A. caviae, 60 por cento de A. sobria e 100 por cento de A. jandaei foram produtoras de B-hemólise em ágar sangue, confirmando seu potencial patogênico